Informe Lab. de Biologia: Normas del laboratorio y uso del microscopio

En el laboratorio de hay gran cantidad de material para utilizar en las diferentes prácticas. Este material es caro y su uso inadecuado puede ser peligroso. Por ello han de seguirse una serie de normas para conseguir la seguridad de los alumnos y el mantenimiento del material.

• En el laboratorio solo se trabajará con los materiales específicos de cada práctica. No se toca ni curiosea el resto del material.

• Sólo se trabajará con materiales y aparatos de los que se conozca su uso.

• No se realizarán experimentos no autorizados.

• Prohibido terminantemente cualquier tipo de juegos o bromas.

• En caso de accidente se avisará inmediatamente al profesor.

• Al finalizar la sesión de prácticas el material utilizado debe quedar en perfecto estado con el fin de facilitar su uso por otros grupos. El material tiene que quedar limpio y recogido. Cada grupo de prácticas se encargará del material utilizado y de la limpieza de su puesto.

• Será el profesor, una vez comprobado el material del grupo, el que autorice la salida del laboratorio.

• Aquellos desperfectos, causados intencionadamente, debidos al uso inadecuado, o la sustracción de material tendrán su sanción correspondiente y deberán ser abonadas por el alumno causante de los mismos.

Uso del microscopio óptico

Objetivos

1. Recordar las partes mecánicas y ópticas del microscopio.

2. Comprender la interrelación entre parte óptica y mecánica.

3. Manejar perfectamente el mecanismo de enfoque del microscopio.

4. Practicar lo estudiado en enfoques de preparaciones de práctica.

Materiales

● Microscopio ● Papel milimetrado ● hilos de colores o cabellos ● papel periódico ● Portaobjetos ● Preparaciones ● goteros

INTRODUCCIÓN

El microscopio (mikrós, pequeño y skopéoo, observar) fue acuñado con este nombre por Jean Faber en 1624. Ya los antiguos babilonios utilizaban lupas; pero el verdadero impulsor del microscopio fue Anton van Leeuwenhöek (1632-1723) que construía microscopios con lentes convexas y observaba distintas estructuras, fue el primero que dibujó y observó Protozoa.

Hay diversas clases de microscopios, simple, de contraste de fases, electrónico, de barrido, etc; nosotros usaremos el compuesto, que consta:

a) Parte mecánica, b) Parte óptica c) Sistema de iluminación.

1. PARTES ÓPTICAS E ILUMINACIÓN DEL MICROSCOPIO

1.1. SISTEMA DE REFRACCIÓN

Un microscopio compuesto tiene dos lentes, objetivo (situado cerca del objeto) y ocular (situado cerca del ojo). El aumento primario del objeto es producido por el objetivo, y el aumento final se realiza en el ocular.

El poder de resolución es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos. Cuanto mayor sea el poder de resolución, mayor será la definición del objeto. El poder de resolución depende de ë (longitud de onda utilizada) y de AN: APERTURA NUMÉRICA (característica de la lente que depende del índice de refracción del medio y del seno del ángulo de apertura). Como ë es constante, el poder de resolución depende de AN, la apertura numérica.

El ojo tiene un poder de resolución de 0,1 mm; y el microscopio de 0,12 F. Un diámetro de 0,2 Fm, si se aumenta 1000 veces aparecerá como un objeto de 0,2 mm

El poder de resolución por lo tanto es directamente proporcional a ë, e inversamente proporcional a AN1

Un factor que afecta a la apertura numérica es, además, de la talla de la lente, el medio a través del cual atraviesa la luz. Mientras el objetivo está separado del objeto por el aire, la AN nunca es mayor que 1; si se desean valores mayores que 1, el objetivo deberá estar inmerso en aceite de cedro que aumente el índice de refracción entre 1,2 y 1,4 (esta lente se denomina lente de inmersión y se diferencia de las otras con la palabra oil. Este objetivo nunca se utiliza sin aceite y una vez utilizado hay que limpiarlo rápidamente para que no se seque el aceite.

1.2. SISTEMA DE ILUMINACIÓN

Este sistema es importante, ya que la luz debe enfocarse sobre la preparación mediante el condensador; subir o bajar el condensador hace que el foco de luz se disponga en un punto. El diafragma controla el diámetro del círculo de luz que alcanza el objeto. Si la luz es brillante se deberá cerrar el diafragma.

Otro aspecto que varía la nitidez de la observación es la profundidad de campo (espesor de la preparación). A mayor aumento la profundidad es menor de 1 Fm. La profundidad de campo es inversamente proporcional al aumento utilizado.

PR= l /AN

COMPONENTES:

Parte mecánica

Comprende el conjunto de piezas que sirven para sostener y manejar los elementos de la parte óptica, las preparaciones y la fuente de iluminación.

• Pie o base: Pieza que apoya sobre la mesa de trabajo sobre la que descansan las demás piezas

• Brazo: Pieza que une el pié con el resto de elementos mecánicos del microscopio.

• Platina: Superficie plana para depositar las preparaciones a observar. Se encuentra perforada en el centro para permitir la entrada de luz. Lleva unas pinzas para sujetar las preparaciones.

• Tubo ocular o cañón: Cilindro hueco que sujeta el ocular. Es móvil para que las preparaciones puedan ser vistas por varios observadores sin mover el pie.

• Tornillo macrométrico: Cilindro giratorio que permite mover verticalmente la platina para conseguir el enfoque de las preparaciones.

• Tornillo micrométrico: Cilindro menor que permite el enfoque fino.

• Revolver: Pieza que contiene los oculares. El él se encuentran atornilladas las lentes de diferentes aumentos. Permite un giro para utilizar los distintos objetivos.

Parte óptica

Conjunto de lentes que permiten el aumento de las imágenes

• Ocular: Situado al final del tubo. Por el se observa la preparación

• Objetivos: Montados en el revólver. Recogen la luz procedente de la preparación.

Fuente de iluminación

• Interruptor: Permite el encendido de la lámpara de iluminación.

• Lámpara: Fuente de luz situada bajo la platina

• Diafragma: Dispositivo situado entre la platina y la lámpara que regula el paso de luz

Preparación microscópica

Los objetos a observar el microscopio han de ser atravesados por la luz para que ésta llegue al ocular y verlos. Por ello han de ser transparentes o, al menos, traslúcidos, y estar montados en una lámina de vidrio transparente de 75x25 mm llamada portaobjetos o porta. En la mayoría de las ocasiones el material a observar se cubre con una lámina de vidrio muy fino de uno 20x20 mm llamado cubreobjetos o cubre.

Cuando los materiales a observar son muy transparentes o sus partes ofrecen poco contraste se tiñen con colorantes de microscopía específicos para cada objeto a teñir. En las tinciones es muy importante controlar las concentraciones de los tintes y los tiempos de tinción.

Manejo del microscopio

El microscopio ha de tratarse con cuidado evitando forzar las piezas. Debe estar situado firmemente sobre el pie evitando que pueda moverse.

Para realizar una observación al microscopio se han de seguir los siguientes pasos:

1. Colocar el microscopio, conectarlo y encender la fuente de alimentación

2. Colocar la preparación en la platina.

3. Colocar el objetivo de menor aumento (el más corto)

4. Enfocar la preparación mirando por el ocular utilizando el tornillo macrométrico

5. Cuando se vea la preparación enfocada regular con el diafragma la cantidad de luz adecuada y localizar zonas interesantes a observar.

6. Ajustar con el tornillo micrométrico.

7. Si es necesario un mayor aumento cambiar el siguiente objetivo y repetir el enfoque y la regulación de la iluminación.

Ejercicios

1 - Pon nombres a las diferentes partes del microscopio

Ocular

Tubo

Brazo

Tornillo macrométrico

Tornillo micrométrico

Base

Revólver
Objetivos
Pinza
Platina
Condensador
Fuente de luz
Interruptor

2 - Calcula los aumentos de tu microscopio

Para ello basta con multiplicar el aumento que proporciona el ocular por el del objetivo

		Objetivos

Ocular	4x	10x	40x
10x	40x	100x	400x

4 - Observa una preparación microscópica y haz un dibujo de la misma.

Los dibujos han de ser de una parte del campo observado, precisos, detallados y grandes y se ha de indicar el aumento con el que se observa la preparación.

5- Preparación De Un Montaje Húmedo De La Letra “H”

Corta un fragmento de periódico donde se encuentre la letra “h”.

Coloca la letra en el porta objeto y luego agrega una gota de agua, cúbrela con un cubre objeto bajando este ultimo de forma inclinad para evitar la formación de burbujas.

Procede observar con el objetivo de 10X y 40X. Observa la posición de la letra “h” con respecto a su colocación sobre la platina, al movimiento de la letra al desplazarla de arriba hacia abajo, hacia la derecha y hacia la izquierda, dibuja o toma fotos.

6- Preparación de una placa con dos hilos (azul y rojo)

Coloca sobre el portaobjeto dos hilos (azul y rojo) o cabellos de distinta tonalidad. de manera que se crucen entre sí, añade una gota de agua y coloca el cubreobjetos.

Enfoca con el objetivo de bajo poder, ahora mueve el micrométrico y describe que observas. Identifica que hilo esta superpuesto.

7- Observación una célula

Pon una gota de azul de metileno diluido en un portaobjetos. Abre la boca y con la parte plana de un palillo de dientes raspa la cara interna de tu mejilla. Coloca el contenido del raspado que hiciste sobre el portaobjetos, golpeando suavemente el palillo en la gota del colorante, y cubre la preparación con un cubreobjetos. Observa a través del microscopio con objetivos de 10 y 40X.

8- Empleo del objetivo de inmersión:

Bajar totalmente la platina.

a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.

b. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.

c. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.

d. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.

e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.

f. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.

g. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.

h. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.

i. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

AUTOEVALUACIÓN

a) ¿De qué partes del microscopio depende la correcta iluminación?

R/ Primero de la fuente de luz, luego, de la altura y abertura del diafragma y el uso correcto del objetivo y oculares.

b) ¿A qué parte del microscopio debe dirigirse la luz de la lámpara?

R/ Al objeto que se pretende observar, pues si no se ilumina, poco se podrá ver.

c) ¿Cómo varía la iluminación al abrir o cerrar el diafragma?

R/ Al abrir o cerrar el diafragma se modifica gradualmente el campo visual sin variar la iluminación de la imagen

d) ¿Cómo varía la iluminación al desplazar el condensador?

R/ conectar el haz de luz en el plano completo que se encuentra en la platina. Debajo de él se encuentra el diafragma iris que regula la cantidad de luz que llega al condensador.

e) ¿Cuántos grupos de lentes hay? ¿Qué nombre reciben?

R/ OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.

OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.

CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.

DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

f) Escribir e interpretar las inscripciones que llevan cada grupo de lentes.

R/OCULAR: normalmente tiene un aumento de 10x por lo que amplia una imagen 10 veces su tamaño normal.

OBJETIVO: por lo normal tiene un aumento que varía entre 4x a 45x. lo norma es encontrar tres objetivos de distintos aumento(4x, 10x, 40).

CONDENSADOR: Los lentes de condensador son más útiles al observar a grandes aumentos de 400 X y más.

g) Enfocando preparaciones con letras interpreta el funcionamiento de los tornillos macro y micrométrico.

R/ Con el tornillo macrométrico se puede mover verticalmente la platina para conseguir el enfoque de las preparaciones y con el tornillo micrométrico se puede obtener un enfoque fino.

g) ¿Qué se entiende por profundidad de campo?

R/ La profundidad de campo es la distancia por delante y por detrás del punto enfocado que aparece con nitidez en una foto.

i) ¿Cuántas imágenes se forman del objeto desde la preparación hasta el ojo?

R/ Se forma una imagen.

j) Cómo se calcula el aumento total del microscopio?

R/El aumento total del microscopio se calcula multiplicando el aumento del ocular por el del objetivo que se está utilizando. En general los oculares poseen diez aumentos (10x) y los objetivos pueden variar 10x (aumento total, 100x), 40x (total, 400x), y 100x (objetivos de inmersión en aceite; total 1000x).

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.

1. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

2. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

3. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.

4. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.

5. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revólver y condensador).

6. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.

7. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.

8. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

Utilizamos el lente número 4x

Al utilizar el lente de menos aumento pudimos observar toda la imagen.